生物顯微鏡除目前推崇的冰凍超薄切片法外,在這里再介紹一種科學(xué)家們用過的沉積技術(shù)。在進(jìn)行分析前加入一種物質(zhì),使之與待分析的成份形成沉積物以固定它,然后分析該沉積物。例如,人們常用草酸鹽與焦銻酸鹽去沉積肌細(xì)胞中的ca。前者對(duì)胞漿中低濃度的ca敏感性不夠高;焦銻吱鹽的敏感性高些,可與腦漿中游離ca形成電子致密的沉積物,但焦銻酸鹽與鈉、錳、鋇、鐵也形成沉積物,特異性較差。標(biāo)本制備過程類似于普通透射電鏡超薄切片標(biāo)本的制備,不同之處在于固定前3%焦銻酸鉀固定6小時(shí),在染色的肌肉超薄切片上,在每個(gè)肌節(jié)的A帶和2帶的中線可見黑色沉淀物、再用未染色的切片做X射線微區(qū)分析。曾用二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸去沉淀含血紅素的物質(zhì)等等。這種組化的沉淀反應(yīng)與x射線微區(qū)分橋聯(lián)合應(yīng)用在不具備冰凍超薄切片條件的實(shí)驗(yàn)室可考慮采用。根據(jù)待分析元素的峰高可做半定量。
理論上,任何光學(xué)系統(tǒng)都不能生成理想的像,因?yàn)榭陀^條件下,各類像差的存在影響了生物顯微鏡的成像質(zhì)量。除了像差之外,還有一些生物顯微鏡自身存在的因素影響生物顯微鏡的成像質(zhì)量。主要有如下幾點(diǎn):
①在使用顯微鏡時(shí),被檢物體做的比較標(biāo)準(zhǔn)很重要。如:切片厚度是否太厚,蓋玻片是否符合標(biāo)準(zhǔn)等。
②物鏡按檔次可分為6~8個(gè)檔,常用的為平場(chǎng)消色差物鏡。如鏡頭檔次太低,則成像質(zhì)量會(huì)下降。因此,建議選擇平場(chǎng)以上檔次物鏡。
③聚光鏡孔徑光欄盡量和物鏡的數(shù)值孔徑相符,才能得到理想的圖像分辨率。
④調(diào)焦系統(tǒng)作為機(jī)械部分的重要部件,調(diào)焦精度也非常重要。對(duì)于生物學(xué)初學(xué)者或剛接觸生物顯微鏡的操作者,熟練使用調(diào)焦系統(tǒng),能快速找到圖像并聚焦,提高工作效率。
⑤載物臺(tái)在觀察切片時(shí),常做X、Y軸的移動(dòng)。如:雙層機(jī)械移動(dòng)臺(tái),精度和穩(wěn)定性較好,能在觀察顯微圖像時(shí)提供好的成像質(zhì)量。
⑥非球面聚光鏡能提供非常均勻的照明光線,所觀察到的顯微圖像襯度。
⑦視場(chǎng)光欄應(yīng)根據(jù)觀察不同的被檢物體和物鏡倍率開啟到合適的位置,如開得過大或過小顯微圖像的視場(chǎng)亮度會(huì)受到影響。
⑧照明系統(tǒng)如采用溫度低,色溫較高的照明裝置,生物顯微鏡觀察到的是分辨率和銳利度較高的顯微圖像。