激光共聚焦顯微鏡的光路系統(tǒng)是其核心組成部分,它決定了顯微鏡的成像質(zhì)量和分辨率。以下是激光共聚焦顯微鏡光路系統(tǒng)的詳細(xì)組成介紹:
一、主要組成部分
激光光源
激光共聚焦顯微鏡采用激光作為光源,激光束具有方向性強(qiáng)、發(fā)散小、亮度高等特點(diǎn)。
光源通常包括多個獨(dú)立的激光器,覆蓋可見光波長范圍,如405nm、458nm、488nm、515nm、559nm、635nm等,以適應(yīng)不同染料的激發(fā)需求。
照明光路系統(tǒng)
激光束首先經(jīng)過準(zhǔn)直擴(kuò)束透鏡組,變成一束直徑較大的平行光束。
然后,光束通過二向色鏡等光學(xué)元件進(jìn)行偏轉(zhuǎn)和聚焦,*終落在樣品的焦平面上。
照明光路系統(tǒng)還包括照明針孔,用于形成點(diǎn)光源,并對樣品進(jìn)行掃描。
發(fā)射光路系統(tǒng)
樣品中的熒光物質(zhì)在激光激發(fā)下發(fā)射熒光,熒光經(jīng)過物鏡、二向色鏡、高通濾波片等光學(xué)元件后,被聚焦透鏡會聚在聚焦透鏡的焦點(diǎn)處。
然后,熒光通過探測針孔,由單點(diǎn)探測器接收。
發(fā)射光路系統(tǒng)還包括探測器前的針孔,用于減少探測器的有效面積,提高成像質(zhì)量。
共聚焦系統(tǒng)
共聚焦系統(tǒng)是激光共聚焦顯微鏡的關(guān)鍵部分,它確保照明針孔、探測針孔和被照射的樣品都處在彼此的共軛位置。
通過焦點(diǎn)共軛的技術(shù),只有焦平面上的光才能通過探測針孔被探測器接收,從而得到清晰的共焦圖像。
其他光學(xué)元件
激光共聚焦顯微鏡的光路系統(tǒng)還包括其他光學(xué)元件,如反射鏡、透鏡組、光闌等,用于調(diào)整光路、控制光束的直徑和聚焦位置等。
二、工作原理
激光光源發(fā)出激光束,通過照明針孔形成點(diǎn)光源。
點(diǎn)光源經(jīng)過物鏡聚焦后,對樣品進(jìn)行掃描。
樣品中的熒光物質(zhì)在激光激發(fā)下發(fā)射熒光。
熒光經(jīng)過發(fā)射光路系統(tǒng)后,被單點(diǎn)探測器接收。
探測器將接收到的光信號轉(zhuǎn)化為電信號。
電信號經(jīng)過計算機(jī)處理后,形成圖像并顯示出來。
三、應(yīng)用
激光共聚焦顯微鏡具有高分辨率、高光敏度等特點(diǎn),廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料科學(xué)等領(lǐng)域。例如,在生物學(xué)中,它可用于觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)分布等;在醫(yī)學(xué)中,它可用于診斷疾病、研究藥物作用機(jī)制等;在材料科學(xué)中,它可用于觀察材料的微觀結(jié)構(gòu)、缺陷等。
綜上所述,激光共聚焦顯微鏡的光路系統(tǒng)由激光光源、照明光路系統(tǒng)、發(fā)射光路系統(tǒng)、共聚焦系統(tǒng)和其他光學(xué)元件組成。這些組成部分共同協(xié)作,實現(xiàn)了高分辨率、高光敏度的成像功能,為科學(xué)研究和技術(shù)應(yīng)用提供了有力的支持。